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熒光信號檢測中怎樣選擇合適的濾光片


使用合適的濾光片可在熒光成像時選擇合適的光線

濾光片組合放在在熒光檢測顯微鏡的不同光點上,用以設定激發樣品的光線波長,并準確捕捉熒光發射的波長。

激發濾光片、二向分色鏡以及發射濾光片通常包含在同一立方體內,通常被設計來匹配特定熒光團或熒光蛋白的光譜。偶爾情況下,濾光片也可能不在立方體內,但會安裝在一個轉輪(稱為濾光片轉盤)上。濾光片轉盤使您可以混合搭配盡可能匹配所需要的激發和發射波長。其終極目標是捕獲到您希望從結合靶標的熒光基團束上捕獲的光信號,同時阻斷系統其他部分的任何光線(環境光、激發光源等)。

熒光信號檢測濾光片的不同類型

通常情況下,濾光片組被設計成可用于捕獲指定熒光團的最大激發和發射波長,但不會捕獲所有的熒光。多數現代化濾光片組的設計旨在確保激發濾光片只允許指定波長區間的光線通過。這種類型的濾光片稱為帶通濾光片(band-pass filter)。帶通濾光片通常通過中間波長和區間寬度確定。在較為簡單的熒光顯微鏡裝置中,一旦激發光線離開激發濾光片,即會照射到靶標上,靶標上的熒光基團隨即變為激發狀態,然后發射向光譜的紅外端(相對于激發光線)遷移的光線。并非所有此類發射光線都會被檢測器捕獲到——僅那些允許通過二向分色鏡且能通過發射濾光片的光線。發射濾光片通常為帶通濾光片或長通濾光片,具體取決于特定的熒光團和成像實驗。如果您希望讓超過特定波長的光線通過檢測器,可選擇長通濾光片.


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